Crianças

O que é o diagnóstico pré-implantacional na fertilização in vitro e o que isso mostra?

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Nesta seção você aprenderá:

Preparando-se para passar pelo procedimento de fertilização in vitro (FIV), toda mulher ou casal tem um certo medo associado à saúde do feto. De fato, ninguém pode prever como a fertilização ocorrerá e quão saudável o embrião se tornará. Mesmo alguns casais absolutamente saudáveis ​​(sua proporção é de 5%) após a concepção, uma criança com uma doença genética ou anormalidades cromossômicas pode nascer naturalmente, o que mesmo exames pré-natais às vezes não podem revelar.

Felizmente, hoje existem técnicas que permitem identificar violações na estrutura do embrião nos primeiros dias de seu desenvolvimento. Primeiro de tudo, é diagnóstico genético pré-implantacional em FIV. Vamos considerar mais detalhadamente o que é exatamente a essência desse estudo.

A partir do nome do procedimento, já está claro que esse diagnóstico genético é realizado antes da implantação do embrião, que foi concebido extracorporalmente, no útero da mulher. Com a concepção natural, o PGD não é realizado.

A análise do PGD na FIV é uma pesquisa de alta tecnologia que é realizada no momento mais precoce do desenvolvimento do embrião - o terceiro ou quinto dia. O principal objetivo do procedimento é selecionar um embrião absolutamente saudável para posterior replantio no útero. Esta análise é realizada em uma pequena quantidade de material biológico e deve ser realizada em um curto espaço de tempo.

Também é importante notar que o PGD deve ter indicações apropriadas.:

  • a idade da gestante tem mais de 35 anos
  • A idade do futuro pai está acima de 45 anos
  • na família de um ou ambos os futuros pais, as mesmas doenças oncológicas ou genéticas são transmitidas de geração em geração,
  • a presença na história médica da mãe da morte do feto (ou recém-nascido) devido a conflitos Rh,
  • aborto espontâneo habitual (abortos ou interrupção do desenvolvimento do embrião no início da gravidez),
  • tentativas mal sucedidas de fertilização in vitro (mais de três)
  • espermogramas baixos do sexo masculino (espermatogênese prejudicada, baixa contagem de espermatozóides no fluido seminal, alta contagem de espermatozóides com estrutura anormal).

PGD ​​torna possível detectar anomalias cromossômicas e doenças genéticas no embrião. Não está excluído que após o diagnóstico de PGD (PGD) durante a FIV de vários embriões resultantes, o replantio será completamente cancelado devido à sua baixa qualidade (isto pode acontecer por várias razões). Quanto mais velha a mulher, maior a porcentagem de rejeição de embriões.

Um estudo como o PGD é, em parte, uma alternativa ao diagnóstico pré-natal, mas não pode, naturalmente, substituí-lo completamente. Mulheres que engravidam após a fertilização in vitro com PGD, assim como todas as outras, devem passar por exames de ultra-sonografia de rotina e outros exames para monitorar o desenvolvimento intra-uterino do bebê.

Deve-se acrescentar que hoje existem poucos centros na Rússia, onde diferentes tipos de genótipos de embriões são avaliados usando o método de diagnóstico genético pré-implantação de PGD em fertilização in vitro - em São Petersburgo, é o centro de reprodução Genesis. O alto equipamento tecnológico, a qualificação e a prática de longo prazo de médicos embriológicos, especialistas em reprodução, geneticistas permitem que os casais inférteis se tornem felizes pais de uma criança saudável.

PGD ​​- o que é isso?

A partir do momento em que o óvulo de uma mulher se funde ao espermatozóide de um homem, tudo é predeterminado no nível genético - cor e crescimento do cabelo, capacidade intelectual e gênero da criança, bem como possíveis anormalidades genéticas e doenças herdadas de pais, avós ou outros parentes. .

O diagnóstico pré-implantação é um complexo de estudos genômicos, que permite identificar no embrião, com poucos dias de vida, vários desvios do desenvolvimento, doenças, síndromes e outros problemas. PGD ​​é capaz de identificar cerca de 150 doenças genéticas hereditárias, entre as quais são bastante comuns - síndrome de Down, Turner, e muito raro - fibrose cística, hemofilia, síndrome da asa de borboleta, etc.

Usando técnicas especiais e equipamentos de alta precisão, embriões doentes são determinados e descartados. Para transplante na cavidade uterina, as mulheres usam apenas embriões de alta qualidade, saudáveis ​​e viáveis.

A FIV padrão não inclui o estágio obrigatório do diagnóstico pré-implantação. Após a fertilização e o cultivo de embriões por vários dias, apenas taxas de crescimento, taxas de esmagamento e viabilidade de embriões são avaliadas. Depois disso, eles são transferidos para a cavidade uterina da mulher. Qual deles vai criar raízes e criar raízes é uma grande questão. A eficácia da fertilização in vitro padrão é de cerca de 35%.

Se o diagnóstico pré-implantação é realizado, os futuros pais podem não se preocupar com o estado de saúde do bebê, mesmo que eles próprios tenham certos problemas genéticos. Além disso, a eficácia da fertilização in vitro com PGD é um pouco maior - cerca de 40-45%. Isso se deve ao fato de que um embrião grande, mesmo implantado no útero, tem poucas chances de desenvolvimento e sobrevivência. É mais provável que um embrião saudável e examinado ganhe uma posição segura e comece a crescer e se desenvolver.

Objetivo da pesquisa

PGD ​​é fortemente recomendado para pais que têm doenças genéticas que podem ser herdadas por um bebê. Além disso, tal exame genético preliminar de embriões não prejudicaria se houvesse doenças hereditárias nas fileiras de parentes próximos dos futuros pais.

O diagnóstico antes da implantação é importante e necessário para casais em que um dos pais carrega a doença ligada ao cromossomo sexual. Por exemplo, uma mulher carrega um gene da hemofilia, mas uma criança só ficará doente se for um bebê do sexo masculino. O DGP, nesse caso, determina o sexo de embriões com apenas alguns dias de vida, e os médicos selecionam apenas embriões que não são ameaçados de hemofilia, isto é, meninas, para replantio.

Uma mulher com um fator Rh negativo e várias gestações no passado (não importa como eles terminaram), o PGD é recomendado, se o esperma de um marido com fator Rh positivo for usado para fertilização in vitro. Neste caso, os médicos selecionarão de todos os embriões resultantes somente aqueles que herdaram a identidade materna do Rhesus. Neste caso, a gravidez após a fertilização in vitro prosseguirá com menor risco, e o bebê não correrá o risco de doença hemolítica.

PGD ​​é recomendado para um casal se uma mulher teve dois ou mais abortos mais cedo, se houve casos de abortos perdidos, e também se qualquer um dos cônjuges no primeiro casamento ou juntos eles têm um filho com anomalias cromossômicas ou patologias genéticas. Diagnóstico antes da transferência permite excluir do número de embriões considerados para transplante aqueles que estão doentes ou têm anomalias de origem não genética.

O diagnóstico pré-implantação no segundo ou terceiro protocolo de IVF permite estabelecer com alta precisão que as causas das tentativas anteriores falharam.

E uma situação completamente diferente do padrão, mas, infelizmente, a situação real - os pais vão à FIV para ter um bebê que pode se tornar um doador, por exemplo, da medula óssea, para seu próprio irmão mais velho ou irmã. Neste caso, confiar na concepção natural é muito arriscado. Uma criança nascida pode não ser adequada como doadora para um parente doente.

O diagnóstico pré-implantação ajudará a selecionar os indivíduos dos embriões resultantes com uma certa combinação de informações genéticas que garantam a coincidência genômica entre as crianças. Este estudo é chamado de tipagem HLA.

O que a pesquisa mostra?

O diagnóstico genético pré-implantação permite que você pré-identifique várias doenças e condições nas quais uma criança pode ser inviável ou incapacitada. Tudo depende das recomendações dadas pelo geneticista. Se necessário, os embriões são examinados apenas para certos critérios e mutações genéticas, mas em geral existe a possibilidade de estimar todos os parâmetros determinados pelo estudo.

Por exemplo, PGD com uma precisão de 97-99% determina cegueira e surdez, surdez congênita, retinoblastoma, anemia de Fanconi, neurofibromatose, fenilcetonúria, miopatia, distonia de torção, distrofia muscular de Duchene e várias outras dezenas de doenças e síndromes perigosas e incuráveis.

PGD ​​também determina o cariótipo do embrião, seu grupo sanguíneo e fator Rh, gênero, a presença de mutações no nível do gene, incomum para os pais e manifestou pela primeira vez.

Quem é prescrito?

Desde o diagnóstico pré-implantação em si não é prazer barato. Nem toda mulher que se atreveu a fertilização in vitro, esta etapa adicional é recomendada. É oferecido a todos, mas existem categorias de pacientes que são altamente indesejáveis ​​por recusarem a avaliação genética preliminar de embriões antes da transferência para o útero.

Esses pacientes incluem:

  • "Idade" mulheres e casais. Com a idade, as células sexuais masculinas e femininas envelhecem e perdem a saúde. Sob a influência de drogas, maus hábitos, ecologia desfavorável e apenas anos passados, seu DNA pode sofrer mutação. Portanto, em mulheres e homens “relacionados à idade”, os riscos de anormalidades cromossômicas fetais são maiores. PGD ​​é altamente recomendado para mulheres com mais de 35 anos, bem como para casais em quem um homem tem mais de 40 anos de idade.
  • Mulheres Rh-negativoque tiveram abortos, abortos espontâneos, parto, crianças nasceram com doença hemolítica. O diagnóstico é relevante apenas se o cônjuge tiver um fator sanguíneo Rhesus positivo. Se o esperma do doador é usado, então o biomaterial masculino é inicialmente selecionado com um fator Rh negativo, então a probabilidade de obter embriões Rh-positivos é zero.
  • Mulheres que já têm uma experiência de 1-2 tentativas de fertilização in vitro sem sucesso na ausência de razões objetivas (os protocolos foram conduzidos corretamente e sem complicações, não há endometriose e outras barreiras à implantação).
  • Se o esperma masculino é usado para fertilização com baixos indicadores de qualidade do esperma (teratozoospermia, azoospermia, asthenozoospermia). Com a concepção natural, os espermatozóides de baixa qualidade morrem, não têm chance de fertilização, com FIV podem fertilizar o óvulo, porque a seleção natural é prejudicada, o que pode levar ao desenvolvimento de diversas patologias no feto.

Tipos de diagnósticos

Existem vários tipos de diagnóstico genético de embriões. Eles diferem em termos de pesquisa, nuances técnicas, equipamentos e métodos de pesquisa. Listamos os principais sem entrar em detalhes genéticos e laboratoriais:

  • Peixe - Este é um método de hibridização fluorescente. Este é um estudo bastante padrão, cujo custo é baixo em comparação com outros métodos de diagnóstico pré-implantação. Mas sua precisão é um pouco menor do que a de outros métodos. Este método é amplamente utilizado em clínicas na Rússia, Ucrânia e Bielorrússia. Clínicas estrangeiras praticamente a abandonaram devido ao fato de que estudos mais precisos apareceram. Além disso, o fato de o estudo ocorrer rapidamente - em poucas horas. A desvantagem é que muitos cromossomos não estão sendo investigados.
  • CGH - método comparativo de hibridização genômica. Maneira muito cara. E tanto financeiramente como temporariamente. Mas a lista de patologias identificadas é maior que a do método descrito acima, e a precisão é incomensuravelmente maior. Entre outras coisas, este método de diagnóstico antes do replantio permite determinar quais embriões têm maiores chances de implantação.
  • PCR - método de reação em cadeia da polimerase. Revela a identidade Rhesus do embrião, seu grupo sanguíneo, bem como uma lista bastante grande de problemas genéticos. O estudo requer um exame preliminar obrigatório de pais biológicos para mutações genéticas. Se uma mulher recebe um embrião doador ou oócitos doados são levados para fertilização, o método de PCR não pode ser usado.
  • Ngs - método de sequenciamento. Este é um método moderno de diagnóstico pré-implantação, que combina o melhor de todos os listados acima. Dá o quadro mais completo do estado de saúde dos embriões, no entanto, e seu custo é maior do que o de outros métodos.

Como está indo a pesquisa?

Para que embriologistas e geneticistas tenham a capacidade de fazer PGD, um número suficiente de ovos deve ser obtido através de estimulação hormonal prévia. Se menos de 3-4, o diagnóstico pré-implantação geralmente não é realizado. Depois que os médicos “organizam” uma reunião dos óvulos com esperma purificado, o desenvolvimento dos embriões é monitorado por 2-5 dias. Então o embriologista pode selecionar o mais viável. No quinto dia, os blastocistos já possuem cerca de 200 células. É possível, sem prejuízo do embrião, levar de 5 a 7 células de cada embrião para pesquisa genética.

Modernos lasers de alta precisão são usados ​​para coletar células, conchas de células são biopsiadas e outros métodos são usados. Uma pesquisa de DNA strand fornece informações abrangentes sobre se o embrião é saudável. Depois disso, é recomendado para transferência.

Se o par concordar com o diagnóstico genético preliminar dos embriões, a própria transferência de embriões pode ser retardada. Se com o protocolo de fertilização in vitro padrão é realizado durante 2, 3 ou 5 dias a partir do momento da fertilização, então os resultados de PGD podem ser esperados de várias horas a 5-6 dias. Assim, o ciclo de fertilização in vitro é estendido por pelo menos uma semana. O custo do protocolo pode aumentar em caso de consentimento para o diagnóstico preliminar de embriões por 40-240 mil rublos.

Tudo depende de quantos embriões você planeja examinar, que método será testado.

Para reduzir custos, um casal pode usar ferramentas de cotas, os diagnósticos são incluídos na lista de serviços que podem ser fornecidos pelo OMS, mas cada clínica deve esclarecer esse problema separadamente. Alguns fazem PGD à custa do orçamento, outros - não.

Complicações possíveis

Como já mencionado, o material para o estudo da genética é obtido por biópsia. Apesar do equipamento ultramoderno de precisão, ainda existe uma chance de lesão do feto durante este procedimento. Mais freqüentemente feridos estão sujeitos a "três dias". Deve-se notar que a probabilidade de lesão é bastante baixa - cerca de 3%, e os benefícios do estudo serão muito maiores. Caso contrário, as complicações com essa FIV podem ser as mesmas que com a FIV em um protocolo padrão.

Qualquer um dos estágios da fertilização in vitro pode estar associado a certos riscos, e isso não irá a lugar nenhum. É importante que todos os riscos sejam baixos.

O casal precisa estar bem ciente de que mesmo os instrumentos modernos e precisos com os quais os médicos da mais alta categoria de qualificação trabalham não garantem 100% de que o bebê será saudável. Assim, com o mosaicismo extensivo, erros biológicos podem ocorrer, e um embrião doente pode ser transferido para uma mulher. Esta probabilidade é, mas é muito pequena - não mais do que 0,05%.

De acordo com informações oficiais da Organização Mundial de Saúde, a fertilização in vitro com PGD aumenta a chance de sucesso do protocolo em cerca de 7-10% em relação à base de 35%. No entanto, não há tantas críticas positivas no segmento russo da Internet sobre diagnósticos pré-implantação.

Algumas mulheres notam que a taxa de sobrevivência de embriões a partir dos quais as células foram levadas para análise é um pouco pior e, portanto, há algumas revisões de protocolos de FIV malsucedidos com diagnóstico genético preliminar do feto. O medicamento não confirma esta opinião popular, e as estatísticas oficiais das estatísticas não indicam uma porcentagem reduzida de implantação bem sucedida após o exame de embriões.

Muitas vezes, as mulheres perguntam se é possível fazer uma PIO para escolher o sexo de um bebê, porque além do fato de que eu realmente quero filhos, eu ainda quero um filho ou uma filha. A capacidade técnica para determinar o sexo está presente, mas nenhum médico peneirará os embriões do gênero "desnecessário", a menos que haja uma indicação específica da genética. (para doenças ligadas ao cromossomo sexual). Discriminação de embriões por gênero é proibida por lei na Rússia.

De acordo com as análises, o processo de diagnóstico em si, que pode durar vários dias, proporciona muitas experiências a uma mulher, porque ela não sabe até o último quantos embriões de alta qualidade resultaram e se eles foram descobertos. Помимо того, ей нужно поддерживать состояние эндометрия в нужной форме -принимать назначенные лекарства, сдавать кровь на прогестерон, делать несколько УЗИ, чтобы определить толщину функционального слоя матки. Это важно, чтобы перенос прошел максимально успешно и плодное яйцо смогло имлантироваться.

Случается, что пока идет диагностика, «удачное» для переноса время проходит. Nesse caso, o protocolo pode ser interrompido e os embriões que passaram no teste são congelados e enviados para o cryobank. Transferi-los estará no próximo protocolo.

Sobre as complexidades do diagnóstico genético pré-implantacional, veja o seguinte vídeo.

revisor médico, especialista em psicossomática, mãe de 4 filhos

O que é o PGD?

O conjunto cromossômico do ovo ou embrião é estudado em laboratório. Dado o desenvolvimento inicial do embrião, o risco de lesão é reduzido para 1%. O procedimento é prescrito em paralelo com o tratamento principal fornecido pelo protocolo. No entanto, necessitará de mais folículos, pelo que a estimulação hormonal dos ovários é realizada de uma forma mais intensiva.

Nem todas as mutações cromossômicas nos pais representam um perigo para a saúde do bebê. O desenvolvimento da patologia depende dos sinais e da combinação de genes na mãe e no pai.

Existem dois tipos de sinais de mutação: dominante e recessivo. A transmissão do gene mutante dominante para o bebê aumenta o risco de patologia na criança em 50%. Se os pais são portadores de um traço recessivo, então uma doença genética aparecerá quando ambos os genes "doentes" da mãe e do pai forem passados ​​para o bebê.

Além disso, algumas patologias genéticas associadas ao sexo. Assim, o vigésimo terceiro par cromossômico feminino se parece com XX, e o masculino XY. Portanto, violações em um cromossomo das mulheres não causarão a doença, já que o segundo bloqueará sua ação. Uma criança nascida saudável continuará a "portadora" do cromossomo defeituoso.

Os homens não têm essa proteção, portanto os meninos darão a luz a eles com uma patologia genética, e as meninas na metade dos casos se tornarão portadoras de um cromossomo "defeituoso".

Usando o diagnóstico genético pré-implantação de embriões, a genética estabelece uma combinação específica que o embrião herda. A informação obtida nos permite determinar se uma criança nasce com uma patologia ou somente se tornará portadora de um defeito cromossômico. Todos os embriões obtidos a partir dos quais os mais “puros” são selecionados são investigados.

Esta análise não deve ser confundida com o rastreio genético pré-implantação. A diferença entre PGD e PGS é significativa. O PGD é realizado para identificar patologias genéticas incuráveis ​​e minimizar os riscos de ter uma criança doente. PGS é um estudo que permite determinar o número de cromossomos, aneuploidia que é compatível com o nascimento e o desenvolvimento fetal do embrião. Simplificando, a tarefa do ASG é aumentar as chances de gravidez selecionando embriões saudáveis. Os pais que recebem PGS não possuem patologias do tipo hereditário, porém existe risco de sua ocorrência.

Assim, o procedimento de fertilização in vitro é realizado em conjunto com o PGD para tais fins:

  • “Impedir” embriões que têm genes defeituosos para replantar,
  • Descubra as razões pelas quais os protocolos anteriores de fertilização in vitro terminaram sem sucesso,
  • Reduzir o risco de ter um bebê com patologia de pais hospedeiros,
  • Determinar o sexo do bebê, eliminando as anomalias cromossômicas por gênero,
  • Identificar embriões que têm uma predisposição para patologias do tipo genético,
  • “Encontre” um embrião que é ideal com o sistema HLA com outras crianças de uma família que pode se tornar um doador durante o tratamento,
  • Reduzir a probabilidade de aborto nos estágios iniciais
  • Reduzir a possibilidade de doença hemolítica
  • Escolha um embrião “ideal”, eliminando a possibilidade de gravidez múltipla.

O diagnóstico genético pode identificar e eliminar tais patologias perigosas:

  • Doença de Tay-Sachs,
  • Anemia falciforme,
  • Doença de Gaucher,
  • Doença de Verdnig-Hoffman,
  • Retinoblastoma,
  • Horey Huntington,
  • Síndrome de Down,
  • Neurofibromatose,
  • Hemofilia,
  • Miopatia
  • Acondroplasia,
  • Fenilcetonúria,
  • Síndrome de Alpers,
  • Doença renal policística
  • Distrofia muscular de Duchenne,
  • Retinite pigmentosa,
  • Doença de Gottington,
  • Myodistrofia de Dyushen,
  • Fibrose cística
  • Anemia Fanconi,
  • Surdo-mudo
  • Distonia de torção,
  • Pênfigo
  • Síndrome de Edwards.

Esta lista não se limita às patologias apresentadas: existem mais de 150 tipos delas.

Observe que os casos de resultados falso-negativos são registrados. O fato é que alguns métodos de pesquisa diagnosticam apenas um certo número de cromossomos. Genes "não contabilizados" podem estar com defeito.

Às vezes há um desenvolvimento em mosaico de mutações. Durante o estudo, a célula é diagnosticada como saudável e a mutação ocorre durante o seu desenvolvimento.

Quando o PGD é necessário?

Já dissemos que o PGD não é feito para todos os pacientes que solicitaram a fertilização in vitro. Existem certas indicações para o procedimento:

  • Os pais são portadores de defeitos cromossômicos, portanto, o risco de transmissão das anormalidades genéticas do bebê é muito alto. "Transportadora" fornece a presença de rearranjo cromossômico ou doenças monogênicas.
  • Categoria de idade dos pais: mães acima de 36 anos, pais cuja idade excedeu 40 anos. Quanto mais velhos os cônjuges, maiores os riscos de desenvolver mutações genéticas, mesmo que os futuros pais tenham o conjunto "certo" de cromossomos.
  • Depois de gestações anteriores, nasceram crianças que morreram de conflito Rh.
  • Genes defeituosos e cromossomos foram identificados nos óvulos e espermatozóides.
  • O espermograma identificou anormalidades graves em um homem (patologias como azoospermia ou oligozoospermia),
  • As tentativas anteriores de engravidar de fertilização in vitro foram infrutíferas,
  • Gravidez emergente termina em abortos nos estágios iniciais do desenvolvimento embrionário,

Dada a impressionante lista de doenças genéticas, o PGD para fertilização in vitro é feito para todas as mulheres cuja idade tenha ultrapassado os trinta e cinco anos. Isso se deve a mudanças relacionadas à idade que podem trazer "surpresas" desagradáveis, mesmo durante a gravidez natural. O envelhecimento dos ovos é acelerado e exacerbado por tais fatores:

  • Terapia a longo prazo com drogas potentes
  • Estilos de vida no passado associados ao consumo de álcool, nicotina, drogas,
  • Patologia crônica,
  • Condições perigosas de atividade profissional,
  • Ecologia ruim.

O diagnóstico genético mostra-se em tais casos:

  • O nascimento de um bebê está associado à obtenção das células-tronco certas compatíveis com o sistema HLA para curar uma criança mais velha,
  • Fator de incompatibilidade rhesus
  • Cônjuges são parentes próximos
  • O par foi exposto à radiação.

A fertilização in vitro com PGD aumenta significativamente o custo do protocolo. Portanto, uma mulher decide de forma independente sobre a necessidade de um estudo. Lembre-se que a fertilização in vitro apenas em 20-40% dos casos termina com a gravidez. Um diagnóstico genético não só identificará possíveis mutações genéticas, mas também aumentará significativamente as chances de uma concepção bem-sucedida.

Preparando e conduzindo PGD com fertilização in vitro

Preparação para o diagnóstico genético pré-implantação de embriões inclui consulta e um exame completo do casal com indicações apropriadas. O médico conta detalhadamente os prós e contras do procedimento. Explica-se à mulher que o diagnóstico genético requer um maior número de ovos maduros. Portanto, a estimulação hormonal dos ovários será intensificada, o que aumenta o risco de superestimulação durante a fertilização in vitro. Após todas as medidas de diagnóstico, prossiga para o procedimento PGD.

Consiste em sete etapas:

  1. Extração de ovos e sua fertilização no laboratório,
  2. Desenvolvimento fetal que dura 3-5 dias,
  3. Seleção dos "melhores", os embriões mais viáveis,
  4. Extraindo células de um embrião de biópsia,
  5. Fixação de blastômero
  6. Hibridização,
  7. Decodificando as informações recebidas.

Mais uma vez lembramos que o estudo não afetará a saúde do embrião: os órgãos e tecidos do feto "não participam" do procedimento.

Após a descriptografia, o geneticista separa os embriões adequados e "defeituosos". Se forem detectados 2 cromossomos que atendam aos padrões, esses embriões estarão sujeitos a replantio. Ovos em desenvolvimento com anormalidades prejudicadas não podem ser implantados.

Métodos PGD

A moderna tecnologia reprodutiva realiza o PGD do embrião por meio de quatro métodos:

Considere as especificidades de cada técnica.

O método citogenético molecular é o segundo nome do método. É amplamente utilizado no espaço pós-soviético, tem o valor mais democrático. Uma desvantagem significativa da hibridização in situ fluorescente (peixe) é a imprecisão do diagnóstico, porque este método examina apenas parte dos cromossomos.

Para o método PGD, os peixes demoram 5 horas. Durante esse período, o geneticista determinará os seguintes fatores importantes:

  • Sequência cromossômica
  • Gênero bebê,
  • A presença das anormalidades genéticas mais comuns.

O método é chamado de hibridização genômica comparativa. Levará muito mais tempo e custará mais. No entanto, a técnica tem várias vantagens importantes que a diferenciam de outros tipos de pesquisa:

  • "Encontra" os embriões mais viáveis ​​com o melhor potencial de implantação,
  • Ele testa muitas células-tronco, o que reduz significativamente os riscos de se fazer um diagnóstico errado.
  • Medidas diagnósticas são realizadas com ovos congelados que serão transferidos para o crioprotocolo.

PCR é uma reação em cadeia de polímero. É capaz de “encontrar” não apenas defeitos no funcionamento dos cromossomos, mas também patologias monogênicas. Usando PCR, os anticorpos da incompatibilidade parental e do Rhesus de embriões são determinados.

Uma condição importante antes de realizar um estudo é o diagnóstico obrigatório dos pais para a presença de mutações genéticas. Tal estudo eliminará erros no diagnóstico de patologia decorrente da mutação de células.

FIV usando um óvulo doador não prevê o estudo por PCR.

Sequenciamento de alto rendimento é o método de diagnóstico mais avançado PGD. O sequenciamento de nova geração é o diagnóstico genético mais caro e eficaz que permite explorar todos os 23 pares de cromossomos. Toda a análise genômica é realizada, pois durante o estudo a exatidão da seqüência de DNA é examinada.

O custo do diagnóstico genético

A fertilização in vitro requer gastos sérios. O diagnóstico genético aumenta o preço às vezes, pois os equipamentos e materiais para o procedimento são muito caros.

É impossível dar uma resposta inequívoca quanto custa PGD, já que o preço do estudo depende de vários fatores:

  • Método diagnóstico
  • O número de embriões estudados,
  • Usando testes extras
  • Estudo de translocação cromossômica.

O custo do diagnóstico depende do número de anomalias investigadas.

Em Moscou, o custo do PGD por embrião é de 25.000 a 30.000 rublos. Para uma pesquisa abrangente, você precisa pagar de 100.000 a 250.000 rublos.

A relevância da análise do PGD

A principal vantagem do diagnóstico de PGD é que todos os procedimentos médicos são realizados antes da gravidez, enquanto o feto ainda está fora do útero. A análise é relevante para casais com um risco aumentado de que os embriões terão anormalidades cromossômicas graves que causarão:

  • aborto espontâneo
  • problemas com implantação
  • gravidez desbotada
  • o nascimento de uma criança que terá deficiências intelectuais ou físicas.

Citação: "O PGD oportuno de embriões ajuda a prevenir situações problemáticas, muitas vezes aumenta as chances de que a gravidez termine com o nascimento de um bebê saudável".

Marina V. Shapnevskaya, embriologista da Clínica “Nascimento”

Curiosamente, a FIV com PGD torna possível planejar até mesmo o sexo do feto.


Coleta de células para análise de PGD

Indicações para PGD com fertilização in vitro

Nem todos os casais que decidem se submeter à fertilização in vitro, fazem diagnósticos de PGD. Existem indicações médicas rigorosas para este tipo de pesquisa. Como regra geral, os cônjuges que têm um alto risco de transmitir doenças genéticas perigosas a crianças tornam-se candidatos à análise pré-implantação.

Os principais objetivos do PGD na fertilização in vitro incluem:

  • triagem de embriões com anormalidades no cariótipo,
  • minimizar o risco de transferência de embriões para a cavidade uterina, que terá anormalidades genéticas,
  • detecção oportuna de embriões que têm uma predisposição para distúrbios genéticos graves,
  • estabelecer o sexo do nascituro para prevenir a transmissão de doenças ligadas ao sexo,
  • determinação das razões pelas quais a implantação não ocorreu em tentativas anteriores de fertilização in vitro,
  • identificação do fator Rh do embrião para excluir o nascimento de uma criança com doença hemolítica,
  • executar a tipagem HLA, se a futura criança se tornar doadora de um irmão ou irmã mais velha.

Pesquisa do material biológico recebido

Indicações para o diagnóstico do embrião antes da fertilização in vitro são:

  • a idade da mulher tem mais de 35 anos e o homem tem mais de 40 anos,
  • anormalidades da espermatogênese,
  • um dos cônjuges é portador de patologias cromossômicas ou genéticas em células germinativas,
  • várias tentativas de fertilização in vitro sem sucesso,
  • aborto espontâneo em mulheres (se houver dois ou mais abortos na história),
  • morte fetal durante uma gravidez anterior devido a um conflito Rh.

Métodos de diagnóstico genético pré-implantação de embriões

A fertilização in vitro com PGD pode incluir apenas ovos ou embriões prontos. A última opção é mais preferível, já que é o mais informativa possível - há apenas material genético de uma mulher no óvulo e ambos os pais no embrião.


A amostragem de material para análise de PGD é geralmente realizada no dia 3

Durante a análise, uma biópsia de um blastômero é realizada em um embrião de quatro a dez existentes que estão em fase de clivagem. Isso geralmente acontece no terceiro dia. As manipulações realizadas não afetam adversamente o futuro feto.

Quando os embriões são verificados (leva dois dias), eles são transferidos para a cavidade uterina, como no protocolo usual de fertilização in vitro. É importante que o replantio seja realizado o mais tardar no quinto dia do desenvolvimento do corpo humano.

Se a criopreservação for usada, o potencial de diagnóstico do PGD é mais amplo. Então, se você fizer uma biópsia e depois preservar os embriões, poderá realizar todos os estudos necessários sem pressa e replantar o próximo ciclo.

Métodos para embriões de PGD

Existem vários métodos eficazes de diagnóstico pré-implantacional:

  • PEIXE Relevante se você precisar excluir a presença de anormalidades cromossômicas estruturais ou numéricas - translocações e aneuploidias. O material obtido durante a biópsia é transferido para uma lâmina de vidro, aquecido a uma certa temperatura e, em seguida, gradualmente resfriado. Neste caso, a casca está quebrada, o citoplasma sai. Segmentos de DNA são rotulados com corantes especiais - sondas fluorescentes. Depois disso, usando um microscópio fluorescente, um geneticista pode contar o número de cromossomos, verificar se há algum anormal entre eles.
  • Ngs Este é o mais novo método de diagnóstico PGD no cryocycle, usando o qual você pode examinar completamente 23 pares de cromossomos. A precisão dos dados obtidos usando o NGS é de 99,9%, ou seja, os erros são improváveis. A tecnologia também torna possível detectar anomalias cromossômicas e monogênicas, mutações, para distinguir a translocação de um conjunto cromossômico saudável, eliminando assim a necessidade de biópsia do blastômero.
  • Reação em cadeia da polimerase (PCR). Uma técnica destinada a identificar cópias específicas do DNA. Para fazer isso, é primeiro desnaturado para desenrolar o fio duplo. Então eles pegam um fragmento, adicionam enzimas específicas e lentamente dobram a quantidade de material genético. Isso permite que o pesquisador veja as zonas de nucleotídeos defeituosas. O método de PCR é mostrado quando é necessário excluir a transferência de doenças monogênicas para a criança (se um de seus parceiros ou ambos forem portadores de genes não saudáveis ​​ou tiverem manifestações clínicas de uma patologia genética perigosa).

Deve-se notar que os métodos de PGD na fertilização in vitro não são cem por cento intercambiáveis. Cada um deles é projetado para identificar grupos específicos de doenças. Portanto, apenas um médico pode decidir qual dos métodos é mais adequado para um casal que se candidatou a ele.


PGD ​​- uma garantia do nascimento de um bebê saudável

Embriões PGD - o custo dos serviços

PGD ​​de embriões para fertilização in vitro é um serviço bastante caro. Na clínica de Moscou “Para o Nascimento” seu preço varia de 83.500 a 90.500 rublos. Este procedimento é muito complexo e envolve o uso de equipamentos caros e consumíveis inovadores. Para conduzi-lo só pode peritos do mais alto nível.

Na clínica “Pelo nascimento”

O custo relativamente alto do diagnóstico genético antes da implantação está associado à complexidade das manipulações. Se você acompanhar as ofertas de clínicas especializadas, o PGD pode ser aprovado em termos mais favoráveis.

O dinheiro pago pelas análises do PGD sempre se paga - afinal, o nascimento de uma criança saudável está em jogo. O tratamento e a manutenção de um bebê com anomalias genéticas graves custam aos pais uma quantia muito maior.

A FIV é perigosa com o PGD?

Преимплантационная генетическая диагностика применяется во всем мире. Ее безопасность научно доказана. Биопсия осуществляется только на том этапе развития эмбриона, когда его клетки еще не дифференцированы. Isto significa que, com mais esmagamento, a célula removida será substituída por outras sem quaisquer consequências para o futuro feto.

PGD ​​não aumenta a probabilidade de defeitos de desenvolvimento em uma criança, mas, pelo contrário, garante o nascimento de um bebê saudável.

Eles fizeram pgd em NGC em São Petersburgo, todo o protocolo também estava lá. Meu marido e eu somos velhos (38 e 40 anos), muito preocupados! E por um bom motivo. O doutor Gvasalia disse que no nosso caso o pgd é praticamente um procedimento obrigatório. Quatro embriões foram checados, o procedimento revelou os mais saudáveis: dois foram plantados. Crescendo por dois meses. )
O procedimento é incrível e muito útil! Claro, estávamos preocupados que a biópsia fosse perigosa, mas na NGC eles nos explicaram tudo, até mostraram um vídeo do processo, e realmente não há nada de errado nisso, apenas vantagens! Ainda existem diferentes métodos pgd, escolhemos NGC. Segundo os médicos, o mais preciso.
>> PGD não aumenta a probabilidade de defeitos de desenvolvimento em uma criança, mas, pelo contrário, garante o nascimento de um bebê saudável.

É verdade !! Use tecnologia moderna, estamos no século 21))

Conceitos Gerais

O diagnóstico genético pré-implantação permite um exame abrangente e excluir a presença de anormalidades cromossômicas em geral ou um desvio específico. Recentemente, paralelamente aos defeitos precoces, foi realizada a triagem de genes que podem provocar a ocorrência de tumores na idade adulta (ovários, intestinos, mamas).

No caso de transporte de doenças genômicas pela mãe, uma biópsia de vários óvulos polares é realizada antes da fertilização. Os métodos descritos são uma alternativa ao diagnóstico pré-natal precoce, que permite prevenir a interrupção da gestação, se de repente o feto tiver patologia genética.

O diagnóstico genético pré-implantação permite determinar o sexo do futuro bebê já no processo de triagem. É usado para prevenir o desenvolvimento de anomalias ligadas ao sexo.

Quem é rastreado?

O diagnóstico genético pré-implantação (PGD) é realizado nos seguintes casos:

  1. A presença de uma ou ambas as doenças hereditárias ou alterações no cariótipo. Muitas vezes, os próprios parceiros conhecem seus problemas com menos frequência - eles descobrirão no processo de triagem.
  2. Aborto habitual. O problema com isso não são as anomalias por parte dos pais (podem não ser de todo), mas as mutações genéticas do feto que causam abortos espontâneos.
  3. A idade das pessoas submetidas ao programa de fertilização in vitro é de mais de 38 anos.
  4. Mais de 3 tentativas mal sucedidas de fertilização in vitro na história.
  5. Infertilidade masculina.
  6. Inclusão de ICSI (injeção intracitoplasmática de espermatozóides) no programa de fertilização. O processo é repleto de desenvolvimento de anomalias genéticas no embrião.
  7. Casos de derrapagem na história.

Recursos do PGD

Pesquisas no campo do diagnóstico genético pré-implantação sugerem que o método tem o direito de existir, ajuda a diagnosticar e prevenir anormalidades cromossômicas, no entanto, requer mais melhorias.

Características PGD são as seguintes:

  • a taxa de aborto na triagem é menor do que sem isso,
  • Atualmente, não há evidências de que a possibilidade de gravidez aumente
  • existe a possibilidade de um resultado falso: o embrião é saudável, e o resultado mostra anormalidades, o embrião está doente e o estudo sugere o contrário (5-10% dos casos).

Realização de diagnóstico genético pré-implantação (exame de blastômeros)

Após o acordo sobre a fertilização in vitro, o reprodutologista avalia a necessidade de PGD do casal. Se houver provas, os parceiros podem concordar ou recusar o procedimento. Em seguida, um documento confirmando a permissão para conduzir a pesquisa é assinado.

No terceiro dia após a fertilização do embrião, o geneticista pega uma das células do blastômero formadas para análise. Acredita-se que isso não tenha efeito sobre o feto, uma vez que todas as células são intercambiáveis.

O especialista realiza pesquisas em uma das áreas escolhidas anteriormente: o estudo da estrutura da célula sob um microscópio de fluorescência especial, o estudo do DNA, utilizando o método de reação em cadeia da polimerase, para determinar a presença de mutação.

Com base no resultado, os embriões que apresentam anomalias não serão utilizados no processo de implantação. Escolhendo saudável e qualidade. Em seguida, um ou vários deles são transferidos para a cavidade uterina da mãe.

Com uma biópsia do corpo polar, o conjunto de cromossomos da mãe é examinado. É realizado no caso em que a linha feminina revelou a presença de patologia geneticamente determinada. O procedimento permite determinar se o ovo é saudável, o qual será utilizado para fertilização, sem violar sua estrutura. Se nenhuma anomalia for identificada, ela pode ser usada para fertilização e transferência para a cavidade uterina.

Há casos em que os corpos polares são rastreados e, em seguida, os blastômeros. Isso permite que você obtenha um resultado mais confiável. O esquema de acordo com o qual o exame será realizado é escolhido por um geneticista.

Métodos utilizados

Os distúrbios numéricos e estruturais dos cromossomos são determinados pelo método de hibridização fluorescente. Este método permite especificar a seqüência de DNA da célula. São utilizadas sondas especiais de DNA que, em sua estrutura, são regiões complementares para as zonas de DNA do blastômero.

A sonda contém um nucleotídeo e um fluoróforo (uma molécula capaz de fluorescência). Após a interação do DNA alvo com a sonda de DNA, formam-se áreas iluminadas, que são vistas sob um microscópio fluorescente.

Use também o método de PCR (reação em cadeia da polimerase). Consiste em copiar uma seção do DNA usando enzimas em certas condições de laboratório.

Diagnóstico de aneuploidia

Este é um dos métodos de diagnóstico genético pré-implantação, permitindo detectar a presença de anormalidades cromossômicas numéricas (para determinar os cromossomos extras ou ausentes).

O material genético consiste em 46 cromossomos, metade dos quais são dados pelo pai e a outra metade pela mãe. Se o embrião recebe um cromossomo extra, ele é chamado de trissomia e a perda de qualquer monossomia. Esses defeitos podem levar às seguintes conseqüências:

  • sem implante de embrião
  • aborto espontâneo,
  • patologias hereditárias (síndrome de Down, Klinefelter, Shereshevsky-Turner).

A infertilidade masculina e a idade de um casal são fatores frequentes no desenvolvimento de tais anomalias.

Patologias monogênicas do PGD

O diagnóstico genético pré-implantação de embriões para determinar a presença de doenças monogênicas é realizado em famílias onde anomalias hereditárias são estabelecidas. Se o casal já tiver um bebê com uma doença homogênea, a oportunidade de ter outro filho doente aumenta várias vezes.

A razão é uma violação da sequência de cromossomos em uma seção específica do DNA. Estas doenças incluem:

  • fibrose cística,
  • síndrome adrenogenital
  • fenilcetonúria,
  • hemofilia
  • anemia falciforme,
  • Síndrome de Vernig-Hoffman.

Vantagens e riscos do método

O diagnóstico genético pré-implantacional, cujas revisões são consideradas ambíguas, apresenta certas vantagens no campo da triagem pré-natal:

  • Somente embriões saudáveis ​​e de alta qualidade são transferidos para o útero,
  • diminui o risco de ter um bebê com anormalidades genéticas,
  • dobrar o risco de aborto,
  • dobrou o risco de fertilidade múltipla,
  • a chance de implantação de embriões aumenta em 10%,
  • 20% de aumento na chance de um nascimento bem sucedido de um bebê.

O risco de dano acidental ao embrião com PGD é de 1%. A probabilidade de um resultado errôneo é de 1:10, além disso, 3% da possibilidade de um embrião com qualquer anomalia ser avaliado como saudável.

A probabilidade de um embrião saudável ser desviado pelos resultados é de 1:10. A chance de 1: 5 de que a transferência de embriões para o útero seja cancelada devido às anormalidades encontradas em cada um deles.

Contra-indicações

O diagnóstico genético pré-implantação (PGD), cujas conseqüências para o embrião não foram identificadas com precisão, tem várias contra-indicações para:

  • fragmentação embrionária de mais de 30% (a formação de fragmentos até 25% é considerada normal),
  • a presença de blastômeros multicore no embrião,
  • o embrião tem menos de 6 blastômeros no terceiro dia de seu desenvolvimento.

Método de segurança

O diagnóstico é realizado em um estágio inicial na criação de um organismo futuro, quando todas as suas células são polipententes, isto é, um organismo saudável de pleno direito pode ser formado a partir de cada uma delas.

Todos os estágios contínuos do PGD não causam tempo ao embrião, ao feto e ao feto. Após a obtenção da amostra para o estudo, ela é preparada de maneira especial. As células são colocadas em uma lâmina de vidro na qual elas são fixas ou em uma solução tampão.

Custo do procedimento

À primeira vista, o diagnóstico genético pré-implantação, cujo custo varia de 50 a 120 mil rublos, parece ser uma manipulação dispendiosa. No entanto, a saúde e o tratamento de uma criança com patologias geneticamente determinadas custará muito mais.

O procedimento oferece todas as vantagens sobre as mulheres que poderiam conceber uma criança de maneira natural, uma vez que tal método diagnóstico não está disponível para elas. O diagnóstico genético pré-implantação, cujo preço é escasso em comparação com a fertilização in vitro, serve apenas como um complemento ao programa geral, que permite não apenas suportar e parir, mas também criar um bebê saudável.

Como as doenças genéticas são herdadas?

Nem toda mutação ou sinal defeituoso nos pais pode causar manifestações da doença em uma criança. Tudo depende se a característica dominante ou recessiva é herdada de cada cônjuge e que combinação de genes a criança terá.

Se um gene que domina um semelhante inalterado é passado para uma criança, então há um risco de 50% de que a patologia hereditária se manifeste. Pais com um gene da doença recessiva carregam uma característica genética dolorosa. Para que uma criança desenvolva sintomas clínicos de patologia, ele deve herdar dois genes recessivos.

Existem também doenças ligadas ao sexo. Nas fêmeas, o vigésimo terceiro par de cromossomos é XX, no sexo masculino, XY. Se no material genético de uma mulher um dos cromossomos é defeituoso, então devido ao segundo, o desenvolvimento da doença é bloqueado, mas um portador do gene patológico está presente. Nos homens, o cromossomo Y é incapaz de bloquear os efeitos do cromossomo X patológico, de modo que a doença se manifesta nos filhos desse par, e as filhas em 50% são portadoras do gene alterado.

O diagnóstico genético pré-implantacional de embriões ajuda a determinar com 100% de precisão em qual combinação o material genético foi herdado, se a criança manifesta a doença ou se será o portador de sinais patológicos.

Quem precisa realizar pesquisas genéticas?

Para PGD, há certas indicações. Recomenda-se realizar um estudo para mulheres que desejam dar à luz após 34 anos. Nessa idade, mesmo com a ocorrência natural da gravidez, aumentam os riscos de ter um bebê com anomalias genéticas.

Oócitos gradualmente envelhecem, são expostos a uma variedade de fatores negativos ao longo de suas vidas:

  • maus hábitos da mãe (fumar, beber álcool),
  • doenças crônicas
  • tratamento com drogas,
  • condições de trabalho prejudiciais (reagentes químicos, fatores físicos na forma de altas temperaturas, vibração, radiação ionizante, campos eletromagnéticos),
  • ecologia ruim.

Com a idade, ovos defeituosos se acumulam, aumentando o risco de transmissão de genes patológicos à progênie. Se tal embrião for transferido para o útero, então, na maioria dos casos, não criará raízes, a gravidez será interrompida por aborto espontâneo. Ou, se a gravidez progredir, o exame subsequente revelará uma patologia que se tornará uma indicação de interrupção. O diagnóstico pré-implantacional ajuda a evitar traumas psicológicos associados ao aborto espontâneo ou ao nascimento de um filho inferior. Um homem cai na faixa etária de risco acima dos 39 anos de idade. Isso inclui os cônjuges com a patologia da espermatogênese.

Mulheres com aborto espontâneo habitual também são recomendadas para PGD. Um dos pais pode ter um defeito nos cromossomos, o que afeta o desenvolvimento do embrião e leva ao aborto espontâneo.

Certifique-se de pesquisar casais que tenham patologia autossômica dominante. Seus filhos em 50% serão portadores de um gene ou com sinais clínicos de doença.

Realize também pesquisas com:

  • 2 ou mais tentativas de fertilização in vitro sem sucesso
  • 3 ou mais tentativas de transferir embriões de alta qualidade em mulheres com menos de 35 anos, que não terminaram na gravidez,
  • grupo de risco para doenças de início tardio,
  • o desejo de ter um filho compatível com o sistema HLA para obter células-tronco para o tratamento de outra criança com uma doença grave,
  • nascimento de uma criança compatível com o fator Rh para prevenção de conflitos.

Realizado de acordo com as indicações, o PGD ajuda a evitar o diagnóstico pré-natal subseqüente - amniocentese, que reduz o risco de aborto.

Objetivos do estudo

Com base nas indicações para diagnóstico, você pode definir seus objetivos:

  1. Exclusão de embriões com cariótipo anormal.
  2. Estabelecer as causas da falha na implantação durante a FIV anterior.
  3. Reduzindo o risco de ter um bebê com anomalias dos pais.
  4. Identificação de embriões com predisposição para doenças graves.
  5. Ter um filho que é compatível com HLA para o tratamento de um irmão ou irmã.
  6. Reduzindo o risco de doença hemolítica no nascimento de uma criança com um certo fator Rh.

O diagnóstico genético pré-implantacional de doenças monogênicas é realizado para identificar:

  • fibrose cística,
  • Doença de Tay-Sachs,
  • hemofilia A,
  • Miodistrofia de Duchenne,
  • anemia falciforme.

A busca por anomalias cromossômicas inclui o estudo de nove delas, que são a causa das seguintes síndromes:

  • Down (cromossomos trissomia 21),
  • Patau (13º cromossoma),
  • Edwards (18)
  • Shereshevsky-Turner,
  • Klinefelter,
  • "Feline pupils" (22),
  • cromossomos 15, 16, 17.

Além disso, a pesquisa genética permite identificar muitas outras doenças.

Técnicas de diagnóstico

Para PGD, embriões ou ovos são usados. Mas no primeiro caso, o estudo é mais informativo, já que o embrião tem o material genético do pai que pode transmitir genes defeituosos.

No estudo realizar uma biópsia de um blastômero em um embrião de 4-10 existente, que está em fase de esmagamento. Isso acontece por 3-5 dias. Nenhum dano ao futuro feto é aplicado.

A técnica pode ser usada apenas no procedimento de fertilização in vitro, combinado com ICSI - inseminação artificial com espermatozóides. Isso é feito de modo que, no processo de biópsia do blastômero, o material genético do espermatozóide que não estava envolvido na fertilização não seja levado para o estudo.

Transferência adicional de embriões e manejo da gravidez ocorre como na FIV normal. Apenas 2 dias são destinados para a análise, o replantio deve ocorrer no prazo de 5 dias de desenvolvimento. Mais oportunidades para diagnóstico no ciclo com criopreservação. Se você realizar uma biópsia de alguns embriões e, em seguida, preservá-los, poderá realizar com segurança a pesquisa máxima possível e, no próximo ciclo, replantar um embrião de alta qualidade.

Desenvolveu várias técnicas para o PGD.

Usado para o diagnóstico de alterações cromossômicas numéricas ou estruturais - aneuploidias e translocações. A célula obtida por biópsia é fixada em uma lâmina, aquecida e resfriada. Quando isso ocorre, a ruptura de sua casca e a liberação do citoplasma. Segmentos de DNA são rotulados com sondas fluorescentes - corantes especiais. Além disso, em um microscópio fluorescente especial, você pode contar cromossomos específicos, identificar normal e patológico.

A reação em cadeia da polimerase é baseada na identificação de cópias específicas do DNA. Para começar, é desnaturado para desenrolar o fio duplo e obter um fragmento. Ao adicionar enzimas especiais, a quantidade de material genético é gradualmente duplicada. Isso permite que você detecte locais defeituosos no nucleotídeo. A técnica é utilizada para pesquisar doenças monogênicas, quando um ou dois cônjuges são definidos como portadores de genes defeituosos ou com sinais clínicos da doença.

  • A mais recente técnica do NGS

Uma inovação é o diagnóstico genético pré-implantacional no cryocycle pelo método NGS, com a ajuda de que se torna possível estudar todos os 23 pares de cromossomos. Sua precisão chega a 99,9%. Ao mesmo tempo, um estudo de patologias monogênicas e cromossômicas, bem como mutações, está em andamento. A técnica permite distinguir translocações balanceadas do conjunto normal de cromossomos. Portanto, não há necessidade de repetir a biópsia dos blastômeros. A automação de alto processo elimina erros adicionais.

Benefícios e riscos

Usando uma análise genética do embrião no estágio de clivagem aumenta as chances de sucesso do implante. Доказано, что хромосомные изменения у зародышей увеличивают вероятность выкидыша на раннем сроке, формирование неразвивающейся беременности. В 21% случаев самопроизвольного прерывания беременности, в том числе полученной методом ЭКО, причиной прерывания становится хромосомная патология плода. С возрастом количество аномалий увеличивается в геометрической прогрессии.Se considerarmos que as mulheres da faixa etária mais avançada são frequentemente recor- ridas a tecnologias de reprodução assistida, fica claro que o diagnóstico deve ser realizado antes do replantio do embrião.

A informação obtida pode ser usada pelo médico durante outras tentativas de fertilização in vitro, bem como sugerir as razões para tentativas anteriores sem sucesso na fertilização.

Ao usar PCR ou um método fluorescente, apenas um certo número de cromossomos pode ser examinado. Portanto, alguns defeitos podem ser herdados.

Acontece que, durante o diagnóstico genético pré-implantação, um embrião anormal é definido como normal. Neste caso, o diagnóstico pré-natal subseqüente ajudará a diagnosticar com precisão a patologia. Neste estágio do desenvolvimento da ciência, o PGD não é capaz de substituir completamente o último. Às vezes, as anomalias genéticas são formadas por um mosaico. Neste caso, uma biópsia de um blastômero confirmará o estado normal do embrião, e a doença surgirá por culpa da célula alterada.

O dano embrionário durante a biópsia é extremamente raro, em 0,1% dos casos. Também deve ser lembrado que, mesmo após o diagnóstico bem sucedido e replantio de um embrião normal, a FIV pode falhar por razões desconhecidas. Neste caso, a causa pode ser distúrbios imunológicos no corpo da mãe, doenças não diagnosticadas. Apenas um exame completo em termos de preparação para a fertilização in vitro, um estilo de vida saudável aumenta as chances de engravidar.

O conteúdo

A ideia de diagnóstico genético pré-implantacional apareceu antes do nascimento do primeiro filho de fertilização in vitro. Em 1967, um artigo foi publicado por R. Edwards (R. G. Edwards) e R. Gardner (R. L. Gardner) na realização de uma biópsia de embriões de coelho para determinação do sexo antes da implantação, em que os autores previram o aparecimento de tecnologias semelhantes em humanos [2]. Entretanto, o diagnóstico genético pré-implantacional em humanos tornou-se possível apenas no início dos anos 90, quando um nível tecnológico suficiente de fertilização in vitro foi alcançado, e uma reação em cadeia da polimerase foi desenvolvida, permitindo a análise de DNA em células individuais.

Em 1989, a primeira tentativa bem-sucedida de determinar o sexo foi realizada usando a análise de PCR do blastômero retirado do embrião no estágio de clivagem (6-8 blastômeros) [3]. Os primeiros partos bem-sucedidos após um procedimento semelhante em casais com risco de doença recessiva ligada ao cromossomo X ocorreram em 1990 [4].

Em 1990, uma doença monogênica foi diagnosticada antes da fertilização, e a técnica incluiu uma análise PCR de células ovais polares [5].

O primeiro nascimento de uma criança após o diagnóstico de PCR pré-implantacional de uma doença monogênica (fibrose cística) ocorreu em 1992 [6].

Posteriormente, hibridização fluorescente in situ (FISH) foi utilizada para determinar o sexo do embrião, bem como anormalidades cromossômicas. A partir de 2012, o método FISH para determinar anormalidades cromossômicas é gradualmente substituído por hibridização genômica comparativa. O método de PCR permaneceu indispensável para o diagnóstico de doenças monogênicas.

O diagnóstico genético pré-implantação é indicado para casais portadores de rearranjo cromossômico ou doença monogênica. Exemplos de doen�s monog�icas incluem fibrose qu�tica, doen� de Tay-Sachs, anemia falciforme, hemofilia A, distrofia muscular de Duchenne e muitas outras.

Além disso, o diagnóstico genético pré-implantação é realizado em casais com um risco aumentado de anomalias congênitas em crianças, o que não está associado ao transporte de mutações diagnosticadas. Esses casos incluem casais em que a idade da mãe é superior a 35 anos, quando a idade do pai é superior a 39 anos, se o pai tem espermatogênese grave prejudicada, casais com abortos habituais, casais com repetidas tentativas de FIV malsucedidas.

No caso de um risco aumentado indefinido de ter um bebê com anomalias congênitas, o diagnóstico genético pré-implantacional é realizado para os nove cromossomos associados às doenças congênitas mais comuns. Estes são o cromossomo 13 (síndrome de Patau), o cromossomo 15 (síndrome de Prader-Willi), o cromossomo 16, o cromossomo 17, o cromossomo 18 (síndrome de Edwards), o cromossomo 21 (síndrome de Down), o cromossomo 22 (síndrome de pupila) e também sexo cromossomos X e Y (várias anomalias numéricas, incluindo a síndrome de Shereshevsky-Turner e a síndrome de Kleinfelter).

Diagnóstico genético pré-implantação é realizado em alguns casos não relacionados com a patologia genética possível do feto, o objetivo de tal diagnóstico é o nascimento de uma criança com certas características genéticas. Tais casos incluem, por exemplo, diagnósticos genéticos pré-implantacionais, conduzidos para evitar conflitos entre os rhesus.

Há casos em que vários pré-requisitos para o diagnóstico genético pré-implantação são combinados. Um exemplo é o caso quando, usando um diagnóstico genético pré-implantacional, um doador compatível com HLA para terapia celular da anemia de Fankoni nasceu em um proband [7]. Neste caso, a anemia de Fanconi foi excluída e o tipo desejado de histocompatibilidade foi selecionado.

Realizar o diagnóstico pré-implantacional só é possível no âmbito do ciclo de tratamento de fertilização in vitro, ou seja, a fertilização in vitro com injeção intraplasmática de espermatozóides (ICSI), ou seja, o espermatozóide é injetado no óvulo manualmente com o auxílio de instrumentos microcirúrgicos. O procedimento de ICSI é necessário devido ao fato de que, na FIV normal, um grande número de espermatozóides é adicionado ao óvulo. Então, ao coletar corpos polares ou blastômeros, existe o risco de que o material genético do espermatozóide que não participou da fertilização entre na análise com a célula embrionária.

A preparação para o ciclo de tratamento e o ciclo de tratamento de fertilização in vitro com PGD em si não difere muito do ciclo de tratamento usual de fertilização in vitro:

  1. uma mulher recebe drogas hormonais para estimular a superovulação
  2. punção do folículo transvaginal é realizada,
  3. A fertilização dos ovos com esperma é realizada no laboratório de embriologia,
  4. transferência de embriões para o útero leva 5-6 dias.

Se um distúrbio genético é herdado de uma mulher, então embriões “saudáveis” podem ser selecionados passando o procedimento de teste apenas para corpos polares, sem tocar no próprio embrião. Você também pode testar apenas blastômeros. Ou um estudo seqüencial de corpos polares, depois de blastômeros, pode ser realizado.

Que tipo de esquema de PGD será aplicado para cada caso específico é determinado mediante consulta com um médico genético ou um consultor de PGD especialmente treinado no planejamento do PGD.

Na primeira divisão da meiose, o oócito de 1 ª ordem é dividido, resultando na formação de um oócito de 2 ª ordem e um pequeno primeiro corpo de redução (ambas as células com um conjunto haplóide de cromossomos). Na segunda divisão da meiose, como resultado da divisão de um oócito de 2ª ordem, formam-se um óvulo e o segundo corpo redutor. O primeiro corpo de redução às vezes também se divide em duas pequenas células idênticas. Como resultado dessas transformações do oócito de 1ª ordem, um óvulo e três corpos redutores são formados, onde tanto o óvulo quanto os corpos redutores possuem um conjunto haploide de cromossomos. Assim, é possível investigar os corpos polares para estabelecer se o ovo herdou um defeito genético.

Após a fertilização dos óvulos pelo espermatozóide no laboratório de embriologia, o embrião se desenvolve - as células se dividem. No terceiro dia, o embrião é composto por 6-8 blastômeros. E no terceiro dia, material biológico é coletado para pesquisa genética - a chamada “biópsia do embrião”, isto é, a extração de um blastômero do embrião (e às vezes também corpos polares) com a ajuda de microtools especiais. O procedimento não viola o desenvolvimento posterior do embrião. Enquanto os diagnósticos genéticos estão sendo realizados, os embriões continuam a se desenvolver em um meio de cultura apropriado até a transferência para o útero no 5º dia de desenvolvimento. Por esta altura, o embrião deve atingir o estágio de blastocisto.

Antes da transferência, o embriologista avalia a estrutura e a forma dos embriões. O resultado do diagnóstico genético é comparado com a morfologia dos embriões e é feita uma conclusão sobre quais embriões são recomendados para a transferência para o útero. Para transferência, os embriões com as melhores características morfológicas são selecionados sem doenças genéticas.

A análise é realizada em um tempo muito curto. Apenas 2 dias estão disponíveis para análise de blastômeros, uma vez que o embrião não pode continuar seu desenvolvimento fora do corpo da mãe além do estágio de blastocisto (5º dia após a fertilização), portanto, o estudo deve ser realizado neste curto espaço de tempo.

Uma abordagem alternativa é realizar PGD no cryocycle. Neste caso, uma biópsia é realizada no 5º dia de desenvolvimento e, imediatamente após, os embriões são submetidos à criopreservação. No mês seguinte, o diagnóstico genético é realizado e os embriões recomendados sem mutações são transferidos para o útero durante o próximo ciclo. A prática de um ciclo desconectado apresenta várias vantagens: menor risco de superestimulação, mais material e tempo para análise, menor procedimento traumático para a biópsia do embrião. A desvantagem de um cryocycle é um tempo maior desde o início da estimulação até a transferência de embriões [1].

  1. Para anormalidades cromossômicas numéricas e estruturais, o FISH é usado (hibridização fluorescente in situ). Geralmente realizado para a análise de distúrbios numéricos de três, cinco ou sete cromossomos, na maioria das vezes os cromossomos 13, 18, 21, X e Y.
  2. Uma alternativa moderna ao método FISH é a hibridização genômica comparativa em microchips (GHS). O GHS permite que você teste todos os cromossomos ao mesmo tempo.
  3. Ao conduzir PGD de doenças monogênicas, o método PCR é usado.

Método de hibridização fluorescente in situ (FISH) é um método de análise citogenética usado para identificar e localizar sequências específicas de DNA em cromossomos metafásicos e em núcleos interfásicos. Este método utiliza sondas de DNA, que são uma seqüência de nucleotídeos de tamanho limitado que é complementar a uma região específica do DNA nuclear. A sonda carrega uma "etiqueta", isto é, contém nucleotídeos associados ao fluoróforo (uma molécula capaz de fluorescência). Após o procedimento de hibridação no caso da formação de uma molécula de DNA híbrida de uma sonda e um DNA alvo em uma preparação citogenética em estudo, a luminescência de seqüências de DNA específicas nos cromossomos ou núcleos pode ser observada usando um microscópio de fluorescência.

A reação em cadeia da polimerase é um método baseado na cópia seletiva múltipla de uma determinada seção do DNA usando enzimas sob condições artificiais (in vitro). Quando isso acontece, apenas a área que atende às condições especificadas é copiada e somente se estiver presente na amostra em estudo.

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